2014年3月13日,台湾地区“卫生福利部”发布部授食字第1031900272号公告,预告制定“食品中动物用药残留量检验方法-胺基醣苷类抗生素之检验(二)”草案,20天内接收公众意见或建议。 食品中动物用药残留量检验方法-胺基醣苷类抗生素之检验(二)草案 1. 适用范围:本检验方法适用于蜂蜜及乳汁中安痢霉素(apramycin)等7品项抗生素(品项见表一)之多重残留分析。 2. 检验方法:检体经萃取及净化后,以液相层析串联质谱仪(liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS)分析之方法。 2.1. 装置: 2.1.1. 液相层析串联质谱仪: 2.1.1.1. 离子源:电洒离子化正离子(positive ion electrospray ionization, ESI+)。 2.1.1.2. 层析管柱:Agilent ZORBAX eclipse plus C18,1.7 μm,内径2.1 mm × 5 cm,或同级品。 2.1.2. 离心机(Centrifuge):可控温达10℃以下。 2.1.3. 振荡器(Shaker)。 2.1.4. 均质机(Homogenizer)。 2.1.5. 氮气蒸发装置(Nitrogen evaporator)。 2.1.6. 固相真空萃取装置(Solid phase extraction vacuum manifolds)。 2.1.7. 旋涡混合器(Vortex mixer)。 2.2. 试药:乙腈采用液相层析级;氨水(约25%)、七氟丁酸(heptafluorobutyric acid)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、盐酸、三氯醋酸(trichloroacetic acid)及乙二胺四乙酸二钠(disodium ethylene diamine tetraacetate, EDTA)均采用试药特级;去离子水(比电阻于25℃可达18 MΩ‧cm以上);安痢霉素硫酸盐(apramycin sulfate)、双氢链霉素硫酸盐(dihydrostreptomycin-sesquisulfate)、健牠霉素硫酸盐(gentamicin sulfate)、康霉素硫酸盐(kanamycin sulfate)、新霉素硫酸盐(neomycin sulfate)、观霉素(spectinomycin-5H2O)及链霉素硫酸盐(streptomycin sulfate)对照用标准品。 2.3. 器具及材料: 2.3.1. 离心管:15及50 mL,PP材质。 2.3.2. 固相萃取匣(Solid phase extraction cartridge):OASIS HLB cartridge,6 mL,500 mg,或同级品。 2.3.3. 滤膜:孔径0.22 μm,PVDF材质。 2.3.4. 容量瓶︰10 mL。 2.4. 试剂之调制: 2.4.1. 5%三氯醋酸缓冲溶液: 取三氯醋酸50 g及磷酸二氢钾1.36 g,以去离子水溶解使成1000 mL。 2.4.2. 0.2 M EDTA溶液: 取乙二胺四乙酸二钠 7.5 g ,以去离子水溶解使成100 mL。 2.4.3. 0.1 M七氟丁酸溶液: 取七氟丁酸1.3 mL,加去离子水使成100 mL。 2.4.4. 冲提液: 取0.1 M七氟丁酸溶液与乙腈以2:8(v/v)比例混匀。 2.4.5. 10 mM七氟丁酸溶液 取七氟丁酸0.13 mL,加去离子水使成100 mL。 2.5. 移动相溶液之配制: 2.5.1. 移动相溶液A: 取七氟丁酸1.3 mL,加去离子水使成1000 mL,以滤膜过滤,取滤液供作移动相溶液A。 2.5.2. 移动相溶液B: 取七氟丁酸1.3 mL,加去离子水使成1000 mL,以滤膜过滤,取滤液供作移动相溶液B。 2.6. 标准溶液之配制: 取相当于含胺基醣苷类抗生素对照用标准品各约10 mg,精确称定,分别以去离子水溶解并定容至10 mL,作为标准原液,移入15 mL离心管中,于-20℃贮存。临用时分别取适量标准原液混合,以去离子水稀释至0.05~3.0 mg/mL,供作标准溶液。 注:由于胺基醣苷类抗生素易带正电荷,可能与玻璃器皿表面产生吸附,应使用PP材质塑料器皿,或经1 N盐酸溶液浸泡10分钟,取出并以去离子水冲洗附着之盐酸,干燥备用之玻璃器皿,以避免吸附问题。 2.7. 检液之调制: 2.7.1. 萃取: 将检体混匀后,取蜂蜜检体约5 g,精确称定,或精确量取乳汁5 mL,置于50 mL离心管中,加入5%三氯醋酸缓冲溶液25 mL和0.2 M EDTA溶液1 mL,旋涡混合1分钟,振荡5分钟,以3200 × g离心10分钟,取上清液。加入0.1 M七氟丁酸溶液5 mL,旋涡混合1分钟,以3200 × g离心5分钟,上清液以氨水调整pH值至4.0,供净化用。 2.7.2. 净化: 取2.7.1.节供净化用溶液,注入预先以乙腈5 mL、去离子水5 mL及10 mM七氟丁酸溶液5 mL润洗之固相萃取匣,弃流出液。以去离子水5 mL流洗固相萃取匣,弃流出液,再以冲提液 5 m L冲提,收集冲提液,于 60℃ 水浴中以氮气浓缩至约1 mL,再以10 mM七氟丁酸溶液定容至2 mL,经滤膜过滤,供作检液。 2.8. 基质匹配检量线之制作: 取空白检体依2.7.节萃取净化及氮气浓缩后,分别添加不同浓度标准溶液1 mL,以10 mM七氟丁酸溶液定容至2 mL,经滤膜过滤后,依下列条件进行液相层析串联质谱分析。就各抗生素之波峰面积,与对应之各抗生素添加浓度,分别制作基质匹配检量线。 液相层析串联质谱测定条件(注): 层析管柱:Agilent ZORBAX eclipse plus C18,1.7 μm,内径2.1 mm × 5 cm。 移动相溶液:A液与B液以下列条件进行梯度分析 移动相流速: 0.3 m L/min。 注入量:5 μL。 毛细管电压(Capillary voltage):5.5 kV。 溶媒挥散温度(Desolvation temperature):550℃。 气簾气体流速(Curtain gas flow):20 psi。 雾化气体(Ion source gas 1):50 psi。 加热气体(Ion source gas 2):55 psi。 侦测模式: 多重反应侦测(multiple reaction monitoring, MRM)。侦测离子对、去集簇电压(declustering potential)与碰撞能量(collision energy)如表一。 注:上述测定条件分析不适时,可依所使用之仪器,设定适合之测定条件。 |